微生物限度检查操作规则.doc 5页...

文件名微生物限度检查操作规程文件编码制剂审查批准日期日期日期实施日期份数3版本号发行范围XX部分,XX部分1份,档案1发行部门XX部分1主要内容和适用范围法规规定了制剂的微生物质量标准。此程序适用于细菌,霉菌,酵母菌和大肠杆菌的检测。 2相关文件《药品生产质量管理规范》(国家药品监督管理局于2010年修订)《中国药典》 2010年第II部分3防止成品,内包装材料和纯净水免受影响产品的过多微生物的目的和原则质量。 4职责检验部门负责对车间清洁区域内的成品,内包装材料,纯净水微生物和沉降细菌进行检验。 5术语微生物:是指一组形式和结构简单的生物。细菌数:指指定单位的非指定无菌药物制剂中被污染的活细菌数。细菌菌落:它是一个处于有限位置的细菌细胞或细菌细胞簇亚博APp买球首选 ,在某些条件下重组人干扰素α2a栓微生物限度检测标准操作规程,它们会繁殖成肉眼可见的细菌菌落。霉菌和酵母菌的数量:是指在规定的单位中,制剂中被非处方的灭菌药物污染的活菌子和酵母菌的数量。大肠杆菌:肠杆菌属大肠杆菌。 6成品的微生物限量标准(单位:单位/ g或单位/ mL)项目名称细菌,霉菌和酵母菌总数,大肠杆菌,国家标准工厂定义的内部控制标准,国家标准工厂定义的内部控制标准,国家标准工厂定义的内部控制标准XXXX≤10002,使用低稀释度平板上的平均菌落数×稀释倍数是报告细菌数。

如果每个稀释水平的平均菌落数不在30-300之间,则将稀释水平最接近30或300的平板菌落平均数乘以稀释倍数以报告细菌数;如果每个稀释水平的平均菌落数在300以内(当10 0)以上时,最高稀释水平的平板上的平均菌落数乘以稀释倍数以报告细菌数;如果每个稀释水平的平均菌落数少于30,通常将最低稀释水平的平板上的平均菌落数乘以稀释因子即可报告细菌计数。 ,或仅最低稀释水平的平均菌落数小于1,报告的细菌数小于10。7. 5. 5. 2对照细菌检查,除非另有说明,否则取10 mL 7. 5. 5. 2. 1大肠杆菌a。取3份胆汁盐乳糖培养基,每份100毫升yabovip25 ,将2份加入指定量的测试溶液中,其中50至100个对照细菌作为阳性对照。对于第三份,添加与原液相同量的稀释剂。测试溶液作为阴性对照,并在36±1°C下孵育18-24小时(如有必要,可延长至48小时)。阴性对照应无菌生长。取上述3种培养物将每种0. 2 mL接种到5 mL MUG培养基培养管中并进行培养。将未接种的MUG培养基管在5小时和24小时作为背景对照,并且在365nm紫外光下观察每个管。阳性对照管是荧光的,而MUG是阳性的。

测试溶液的MUC管是荧光的,MUG是阳性的,测试溶液的MUG管没有荧光,而MUG是阴性的。然后向MUG管中加入几滴靛蓝基质测试溶液,液体表面呈玫瑰红色表示阳性,而试剂的颜色呈阴性。 b当阴性对照阴性时,阳性对照正常生长,并且测试溶液的胆汁盐乳糖培养基清楚地证明无菌生长,并判断未检测到大肠杆菌。如果测试溶液的MUG呈阳性且靛蓝基质呈阳性,则判断为检测到大肠杆菌;否则,检测为阴性。如果MUG为阴性,靛蓝基质为阴性,则判断为未检测到大肠杆菌。 c如果MUG为阳性,靛蓝基质为阴性,或MUG为阴性,靛蓝基质为阳性,则应在曙红亚甲基蓝琼脂平板或MacConkey琼脂平板上划线测试溶液的胆盐乳糖培养基培养物,并培养18-24小时后,随着上述测试溶液培养物的分离板无菌生长重组人干扰素α2a栓微生物限度检测标准操作规程,判断未检测到大肠杆菌。如果有菌落生长,应选择2-3个可疑菌落进行靛蓝基质试验(Ⅰ),甲基红试验(M),乙酰甲基甲醇生产试验(VP),柠檬酸盐利用率试验(C)和革兰氏染色,镜检。根据表1确定结果。①靛蓝底物试验(Ⅰ)取可疑菌落或倾斜培养物,将其接种到蛋白ept水培养基中,培养24小时。沿管壁加入几滴靛蓝基质测试溶液,液体表面呈玫瑰红色表示阳性;试剂的颜色为负。 ②甲基红试验(M)取可疑菌落或倾斜培养物,接种于磷酸葡萄糖蛋白one水培养基中,培养48±2小时。向试管中加入几滴甲基红指示剂溶液,并立即观察。培养液表面为鲜红色或橙红色为阳性;黄色为负。

③乙酰甲基甲醇生产实验(V-P)取可疑菌落或倾斜培养物,接种于磷酸葡萄糖蛋白one水培养基中,培养48±2小时。每2 mL培养基中加入1 mLα-萘酚乙醇测试溶液,混合均匀亚博APp买球首选 ,然后加入4 mL 40%氢氧化钾溶液0.,摇匀,如果4小时内出现红色,则为阳性,无红色反应为阴性。 ④柠檬酸盐利用试验(C)取可疑菌落或倾斜培养物,接种在柠檬酸盐培养基的倾斜表面上,培养48-72小时。在培养基的倾斜处有菌落生长。介质从绿色变为蓝色为正,介质的颜色变为负。 d结果判断请参见表1。对于对MUG-I无反应的可疑菌株[请参阅注释[1)(2)]),应将其重新分离,培养并通过生化测试确认。表1 MUG结果判断为MUG-I曙红亚甲蓝琼脂IMVic结果++-+ - +-+细菌生长与细菌生长伴随细菌生长- +-(1) ++-(2)大肠杆菌未检出大肠杆菌未检出未检测到大肠杆菌(3)在大肠杆菌中检测到[2)注意(1),(2)如果(1)出现++-或(2)出现- +-应该重新隔离,再次进行MUG-I和IMVic检测。(3)革兰氏阴性细菌囊肿1/5

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